免疫荧光染色技术

免疫荧光技术，又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中最早发展的技术之一。它建立在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上，用于定位组织或细胞内的抗原物质。

免疫荧光技术主要包括荧光抗体法和荧光抗原法。荧光抗体法利用荧光抗体示踪或检查抗原，而荧光抗原法则用荧光抗原标记物示踪或检查抗体。该技术具有特异性强、敏感性高、速度快的特点，但也存在非特异性染色问题、结果判定的客观性不足和技术程序复杂等缺点。

以下为石蜡切片免疫荧光染色实验步骤：

1.多聚甲醛固定组织脱水：依次用75%酒精、85%酒精、90%酒精、95%酒精、无水乙醇进行固定和脱水。

2.组织透明：使用无水乙醇和二甲苯溶液进行浸泡。

3.浸蜡：将透明后的组织块依次浸入三个不同温度的石蜡中。

4.包埋：将浸透蜡的组织块包裹在石蜡块中。

5.切片和烤片：将蜡块切片，然后在60℃烤箱中烤片3个小时。

6.切片脱蜡：将石蜡切片依次放入不同浓度的乙醇和二甲苯中脱蜡。

7.抗原修复：使用微波进行抗原修复，然后用PBS冲洗切片。

8.血清封闭：滴加正常山羊血清进行封闭，以减少非特异性染色。

9.一抗染色：滴加稀释好的一抗，在4°C湿盒中孵育过夜。

10.荧光二抗染色：滴加稀释好的荧光二抗，在湿盒中孵育1小时。

11.DAPI复染核：滴加DAPI进行核染色。

12.用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

以下为细胞爬片免疫荧光染色实验步骤：

1.用PBS浸洗细胞爬片，然后用4%的多聚甲醛固定。

2.使用0.5%Triton X-100进行通透处理。

3.滴加正常山羊血清进行封闭。

4.滴加稀释好的一抗，在4°C湿盒中孵育过夜。

5.使用PBST浸洗爬片，然后滴加稀释好的荧光二抗。

6.DAPI复染核。

7.用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。