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5个要点，助您告别蛋白包涵体

大肠杆菌表达系统在蛋白表达领域占据主导地位，因其代谢途径与基因表达调控机制研究透彻、培养周期短、目标基因表达水平高且遗传背景清楚，被广泛采用。然而，大肠杆菌表达蛋白时常面临包涵体问题，导致蛋白失活，令研究者头疼。AtaGenix公司提供了一套解决方案，帮助您告别蛋白包涵体的困扰。

要实现大肠杆菌中的可溶性蛋白表达，主要可以从五个方面入手：

1. **信号肽的优化**：信号肽通常引导新合成的蛋白质向分泌通路转移，但在大肠杆菌内，其功能丧失，且可能促进蛋白形成不可溶状态。通过去除信号肽，可以促进蛋白的可溶性表达。

2. **密码子优化**：根据大肠杆菌对密码子的偏好性进行优化，选择使用频率大于20%的密码子，可提高mRNA二级结构的稳定性，避免因tRNA库不足导致的翻译延迟、终止、移码或错配等问题。

3. **合适的表达载体**：选择适用于特定蛋白表达的载体，如pET28系列适用于广泛的表达，pET22b则利于二硫键形成和蛋白质正确折叠，促进目的蛋白的可溶性和活性。融合载体如pGEX4T、pET32和pET43.1等也能增加蛋白的可溶性。此外，pCold及pBAD系列载体同样值得考虑。

4. **恰当的表达菌株**：根据蛋白特性和表达需求，选择合适的菌株进行表达。常规蛋白表达通常选用BL21菌株，而T7E菌株可增强蛋白表达，Origami菌株有助于促进二硫键形成，Arctic菌株可在低温环境下诱导表达，改善蛋白的可溶性及活性。

5. **优化表达条件**：综合考虑载体与菌株的相容性，以及诱导表达条件的优化，如培养基选择、诱导温度和诱导剂浓度调整等，可大大降低包涵体的生成概率。

虽然提升可溶性蛋白表达是目标，但包涵体并非完全负面，它们表达量高、纯化方便，易于获得高纯度蛋白样品。对于需要蛋白免疫动物制备WB类用途的抗体实验，包涵体同样是一个不错的选择。

希望这篇文章能帮助您解决大肠杆菌表达系统中遇到的包涵体问题。未来，我们将为您详细介绍其他表达系统，如枯草杆菌表达系统、酵母表达系统、哺乳细胞表达系统和昆虫表达系统，提供更高效获取活性蛋白的途径。如果您暂时不需要这方面的信息，不妨分享给朋友，也许他们正为包涵体问题困扰。