结晶紫染色和Giemsa染色有什么不同
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- 2025-05-05 14:11:11
结晶紫染色法测定细胞数
1．在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。
2．用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个，3个阳性对照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔各加100μl RPMI-1640培养液。继续培养18～24小时。
3．甩去培养液，用PBS小心洗涤一次，每孔加0.1ml 10％甲醇溶液固定细胞30秒钟。
4．吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml结晶紫染液，室温中放置20分钟。
5．轻轻甩去染色液，用蒸馏水洗涤各孔，将培养板倒置于吸水纸上吸干水分。自然干燥或37℃烘干。此板可以在室温中长期保存。
6．测定前，每孔加0.1ml 33％醋酸脱色，充分振荡后在570nm处测定光吸收度。用光吸收度（OD）值对样品稀释度作图，比较标准品曲线和待检样品曲线即可得到待测样品中的细胞因子活性
Giemsa染色
1．染液配制
I液的配制：
迈格染料 lg
甲醇 100ml
在研钵内用少量纯甲醇将染料充分研磨成均匀一致的悬液，倒人烧瓶中，加入其余的甲醇后置入37℃温箱4-6小时，每隔半小时研磨半小时，然后放入深棕色瓶内，在室温下保存，2周后使用。临用前取上液40ml，加纯甲醇20ml混合用作工作液。
Ⅱ液的配制：
姬氏染粉 0.6g
甘油 50ml
甲醇100ml
将姬氏染粉溶于甘油内，在研钵内研磨3-4小时，使之磨匀，加入纯甲醇后搅拌均匀,放入深棕色瓶内，室温下保存，2周后即可使用。
磷酸缓冲液配制：1％磷酸氢二钠20ml，l％磷酸二氢钠30ml，加蒸馏水至1000ml，调整pH 6.4-6.8(用蒸馏水代替缓冲液，效果亦佳)。
2．染色步骤
(1)自然干燥的细胞涂片(预先滴加甲醇固定更好)水平置于染色架上。
(2)将I液(用缓冲液或蒸馏水5-10倍稀释)滴盖涂片上，lO-30分钟。
(3)倒弃涂片上的I液，自来水漂洗干净。
(4)立即滴盖Ⅱ液(用缓冲液或蒸馏水5-10倍稀释)在涂片上染色10-30分钟。
(5)倒弃涂片上的Ⅱ液，自来水漂洗干净。
(6)趁湿加盖片或待干后镜检。
3．染色结果
MGG染色将细胞核染成紫红色，细胞质和核仁染成蓝紫色。
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