杆状病毒质粒构建步骤
- 培训职业
- 2025-05-05 06:29:37
1、构建含双启动子，能定向快速克隆PCR产物的供体质粒。
2、将I－SceI表达盒引入到E.coliDH10B的基因组中，同时将2个I－SceI位点和一个抗性基因引入杆状病毒Bacmid，并且将能表达Red－Gam重组酶的质粒转化进E.coliDH10B中，构建新的受体菌株CTRDH10B。
3、将重组供体质粒导入CTRDH10B/Bacmid/pML104中，诱导I－SceI内切酶和Red－Gam重组酶表达，在细菌内同源重组获得重组Bacmid。
4、常规方法制备重组BacmidDNA转染昆虫细胞并进行分析。本发明无须复杂的PCR验证和繁琐的空斑纯化，做到真正高效、快速、方便，特别适合构建高质量库容量大的杆状病毒cDNA文库。
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